Confronto tra diverse fasi mobili per la determinazione in hplc di carnosina, anserina, l-istidina, 3-metil-l-istidina

Ducci, Michele and Niccolini, Alberto and Pacchini, Sara and Della Longa, Augusto and Buoncristiani, Patrizia and Martelli, Franco (2004) Confronto tra diverse fasi mobili per la determinazione in hplc di carnosina, anserina, l-istidina, 3-metil-l-istidina. Annali della Facoltà di Medicina veterinaria, LVII/2 . pp. 171-180. ISSN 0365-4729

Preview

PDF Download (243Kb) | Preview

Abstract

RIASSUNTO Scopo della ricerca è stato quello di determinare la miglior fase mobile che in condizioni isocratiche ed alla temperatura di derivatizzazione post colonna di 50°C consentisse la separazione dei picchi della carnosina, anserina e dei loro componenti. Partendo da una fase mobile costituita da 20% acetonitrile e 80% di soluzione 6 mM HCl + 0,48 moli/litro di NaCl, sono state preparate fasi mobili con % di acetonitrile a decrescere (15-10-5) fino al raggiungimento della separazione completa dei picchi. La fase mobile che ha permesso la totale separazione delle molecole è stata quella costituita dal 5% di acetonitrile. Le rette di regressione di ciascuna molecola hanno mostrato R2 di correlazione estremamente elevati (∼1) per un intervallo di concentrazione compreso tra 62.5 – 0.5 ng/20μl evidenziando una elevata accuratezza (∼100%) ed un aumento della sensibilità per ogni composto a tutte le concentrazioni utilizzate. Quindi, se l’aumento della temperatura della reazione di derivatizzazione post colonna con o-ftalaldeide (OPA) ha prodotto un forte incremento della sensibilità di rilevazione di questi composti ed in particolare modo della l-istidina e della 3-metil-l–istidina (∼70%), l’utilizzazione di una diversa fase mobile ha consentito la separazione di tutti i composti e principalmente la carnosina dalla 3-metil-l-istidina che in condizioni isocratiche mostrano tempi di ritenzione molto ravvicinati. In conclusione la possibilità di poter determinare esigue concentrazioni di questi composti con una adeguata sensibilità ed un’elevata accuratezza può consentire di rilevarli anche in quei compartimenti dell’organismo dove la loro presenza appare molto ridotta. SUMMARY This research proposes an high-performance-liquid-chromatography (HPLC) method for a quantitative detection of carnosina, anserine, l-histidine and 3-methyl-l-histidine, with ophthalaldehyde (OPA) post column derivatisation by isocratic elution. For this purpose some mobile-phases were prepared with scalar acetonitrile concentrations. The best mobile phase for a complete separation of all molecules was composed of Acetonitrile and 6mM Hydrochloric acid with 0,48 M sodium chloride solution (5%:95% v/v). The regression lines, obtained by a range of concentration between 62.5 – 0.5 ng/20μl for all substances showed a very high values of R2 (∼1) indicating a very high sensibility and accuracy (∼100%) of this new mobile phase in isocratic conditions. Temperature increase of post column derivatisation (50°C) with (OPA) showed a greater sensibility for l-histidine and 3-methyl-l-histidine detection (∼70%) and the new mobile phase in isocratic conditions produced a complete separation for all compound and in particular way between carnosine and 3-methyl-l-histidine. The high sensibility of this HPLC method can detect histidine dipeptides and correlated compounds l-histidine and 3-methyl-l-histidine in animal tissues where can be present in different and very low concentrations. In addition this very simple and fast method could be used to histidine dipeptides detection in biological compartments were their concentrations could be very low.

Repository staff only actions