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Applicazione di un kit di analisi per la determinazione quantitativa della superossido dismutasi nel seme crioconservato di asino

Ducci, Michele and Pacchini, Sara and Felicioli, Antonio and Ducci, Cosimo and Sighieri, Claudio and Rota, Alessandra and Martelli, Franco and Gazzano, Angelo (2007) Applicazione di un kit di analisi per la determinazione quantitativa della superossido dismutasi nel seme crioconservato di asino. Annali della Facoltà di Medicina veterinaria, LIX/20 . pp. 253-262. ISSN 0365-4729

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    Abstract

    RIASSUNTO Le superossido dismutasi (SOD) sono una classe di metalloenzimi che catalizzano la dismutazione dell’anione superossido in ossigeno molecolare e perossido di idrogeno, attraverso reazioni di ossido-riduzione che coinvolgono lo ione metallo del sito attivo. Sotto questo aspetto, la SOD assume un ruolo centrale nella risposta dell’organismo alla tossicità dei sottoprodotti metabolici dell’ossigeno. Alla luce del coinvolgimento delle diverse forme di SOD nei meccanismi legati allo stress ossidativo, quali l’invecchiamento e l’insorgenza di varie patologie, sono stati sviluppati alcuni kit per il dosaggio quantitativo delle SOD nel sangue. Nell’ambito di un rinnovato interesse degli aspetti riproduttivi per specie minori di interesse zootecnico, la determinazione quantitativa della SOD nell’eiaculato può essere di particolare utilità per lo sviluppo e messa a punto di tecniche di conservazione e di valutazione della qualità del seme. Scopo di questa indagine è stato quello di verificare la possibilità di applicare un kit commerciale per la determinazione della SOD negli spermatozoi e nel plasma seminale di Asino amiatino, specie questa di particolare interesse per la salvaguardia di una razza autoctona in via di estinzione. I dati ottenuti hanno mostrato la presenza di questo enzima nelle due tipologie di campione e che, a parità di % di inibizione, nel plasma seminale la SOD è risultata 10 volte più concentrata (235,65 UI/ml) rispetto a quella determinata negli spermatozoi (19,15 UI/ml). Di particolare interesse applicativo è risultata la determinazione della diluizione ottimale che ha consentito di rilevare la % di inibizione che rimane su valori costanti per le diluizioni di 1/110 - 1/140 per gli spermatozoi (concentrazione del campione 575*106 spermatozoi/ml) e di 1/1400 – 1/1700 per il plasma seminale che corrispondono al tratto lineare della cinetica enzimatica della SOD. La diversa concentrazione di SOD nei due campioni, a parità di % di inibizione, potrebbe essere una caratteristica intrinseca come pure, invece, essere dovuta alla procedura di preparazione del campione. Infatti l’utilizzo della procedura del cold-shock potrebbe avere permesso la liberazione di enzimi dal cappuccio acrosomiale che, a loro volta, potrebbero avere contribuito ad inattivare parte della SOD presente oppure, di converso, l’efficienza della rottura delle membrane negli spermatozoi potrebbe non essere stata sufficiente. In conclusione: il kit pur essendo specifico per campioni eritrocitari può risultare applicabile anche a campioni biologici diversi quali gli spermatozoi ed il plasma seminale di asino purché l’analisi della SOD venga effettuata nell’intervallo di diluizione 1/110 – 1/140 per gli spermatozoi (concentrazione del campione 575*106 spermatozoi/ml) e di 1/1400 – 1/1700 per il plasma seminale. SUMMARY Superoxide dismutase (SODs) are metalloenzymes that catalyze the dismutation of the superoxide anion to oxygen peroxide and molecular oxygen by redox cycling involving a metal ion. Superoxide dismutase is an important enzyme in the antioxidant cellular pathway so the amount of SOD in cell and in the extracellular environment have consequences in prevention of aging and disease. The oxide anion dismutation catalyzed by the SOD in a very fast reaction (2*109 M-1sec-1 turnover) and one unit of SOD is defined as the amount of enzyme needed to exhibit 50% dismutation of the superoxide radical. In order to assay the SOD activity in plasma, serum, erythrocyte and cell lysate several kit are available. The aim of this investigation was to assay SOD activity in seminal plasma and spermatozoa of the Amiata Donkey by using a commercial kit. The Amiata Donkey is an endangered native species and SOD quantitation could contribute for the development and new set up of semen conservation methods and quality valuation. SOD was detected into both the samples. SOD in seminal plasma resulted to be 10 time more concentrate (235,65 UI/ml) than in spermatozoa (19,15 UI/ml). Concentration differences between the two samples could be a real sample intrinsic difference as well could be due to the spermatozoa protein extraction method. Spermatozoa underwent to a cold-shock treatment so that the subsequent release into the medium of the acrosomial proteinase could have, as a consequence, the partial inactivation of the SOD; as well the same treatment could be not sufficient for the complete membrane disruption. The kit resulted suitable for the assay of the SOD into ejaculate of the Amiata Donkey in the dilution range (1/110–1/140) in spermatozoa (with a concentration of 575*106 spermatozoa/ml) and (1/1400 – 1/1700) for the seminal plasma.

    Item Type: Article
    Additional Information: Lavoro eseguito con finanziamento PRIN, numero protocollo 2004075420_003.
    Uncontrolled Keywords: SOD, spermatozoi, plasma seminale, asino, SOD, spermatozoa, seminal plasma, donkey.
    Subjects: Area07 - Scienze agrarie e veterinarie > VET/02 - Fisiologia veterinaria
    Divisions: Dipartimenti (until 2012) > DIPARTIMENTO DI ANATOMIA, BIOCHIMICA E FISIOLOGIA VETERINARIA
    Depositing User: dott.ssa Sandra Faita
    Date Deposited: 22 Feb 2008
    Last Modified: 20 Dec 2010 11:58
    URI: http://eprints.adm.unipi.it/id/eprint/426

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