Produzione di anticorpi altamente specifici diretti contro l’aflatossina B1

Guidi, Alessandra and Iannone, Giorgio and Castigliego, Lorenzo and Gianfaldoni, Daniela (2002) Produzione di anticorpi altamente specifici diretti contro l’aflatossina B1. Annali della Facoltà di Medicina veterinaria, LV/200 . pp. 195-204. ISSN 0365-4729

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Abstract

RIASSUNTO Le Aflatossine, appartenenti al più ampio gruppo delle micotossine, sono metaboliti tossici prodotti da Aspergillus spp., la cui importanza ispettiva è legata alla contaminazione di alcune derrate alimentari e mangimi animali. Tali molecole sono responsabili di molti effetti biologici pericolosi per l’uomo e per gli animali. Si capisce quindi l’importanza di un controllo efficace e costante e la necessità di un continuo miglioramento delle metodologie di rilevamento grazie anche agli avanzamenti della ricerca biotecnologica. In questo lavoro sono riportate le fasi preliminari della messa a punto di un metodo immunologico, eventualmente applicabile al settore biosensoristico, per il rilevamento della Aflatossina B1 in vari tipi di substrati. In particolare, sono stati prodotti anticorpi policlonali di coniglio e di topo e monoclonali di topo che, dai test effettuati, hanno rivelato una buona affinità ed un’elevata specificità nei confronti di tale antigene, caratteristiche fondamentali per un possibile utilizzo su immuno-biosensori, oltre che per lo sviluppo di metodiche classiche. SUMMARY Mycotoxyns are a structurally diverse group of secondary metabolites produced by different genera of fungi. They include Aflatoxins derived from Aspergillus spp. Such toxins are found world-wide in food and feed and exhibit a wide array of biological effects (genotoxic, carcinogenic, embryotoxic and teratogenic) in humans and animals. From here the importance of a continuos and efficient survey. In this work, with the aim to set up a rapid and sensitive immunological method, suitable for biosensors, we present the results obtained from the production and the characterization of anti-Aflatoxin B1 antibodies. Polyclonal antibodies against Aflatoxin B1 were produced in rabbits and mice by immunisation with Aflatoxin B1 covalently bound to Bovine Serum Albumin (BSA). Monoclonal antibodies specific for Aflatoxin B1, were obtained after fusion of mouse myeloma cells with splenocytes of immunised mice. In order to characterise our antibodies we have performed classical immunoenzymatic test (ELISA). Results shows that both polyclonal and monoclonal antibodies are able to bind the antigen with high selectivity and specificity. Particularly, our monoclonal antibodies are capable to discriminate Aflatoxin B1 from its hydroxylated form (M1), with a very good repeatability and then showing all the essential features to set up immunological analysis either classical or implying the use of immunosensors.

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